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更新时间:2025-12-19
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一、产品描述
英文名称:Anti-Motilin Antibody
中文名称:抗MTLN多克隆抗体
货号:STJ195701-200ug
规格:200 µg
类型:冻干粉或液体形式
本产品为抗MTLN抗体(Anti-MTLN antibody),针对人源MTLN蛋白设计,经序列比对验证,亦可交叉识别部分哺乳动物(如小鼠、大鼠)的MTLN同源蛋白(具体交叉反应性请参考批次检测报告)。抗体纯度≥95%,经SDS-PAGE和高效液相色谱(HPLC)验证;内毒素含量<1.0 EU/µg,确保适用于细胞培养及体内实验(如适用)。每批次产品均附带详细质检报告(CoA),包含浓度、纯度、特异性、效价及应用验证数据,保障实验结果的可靠性与可重复性。
二、产品特点
1. 高特异性识别:本抗体采用重组人MTLN蛋白或其关键抗原表位肽段免疫宿主,经亲和层析纯化,能特异性识别天然及变性状态下的MTLN蛋白,显著降低非特异性背景信号。
2. 多平台兼容性:已验证适用于Western Blot、IHC、IF、ELISA、IP等多种主流免疫检测技术,满足不同实验需求。
3. 批次间一致性优异:St John's Laboratory实施严格的生产质控体系,确保不同批次产品在效价、特异性和灵敏度方面高度一致,减少实验重复成本。
4. 低交叉反应性:经BLAST比对及实验证实,本抗体与胃泌素(Gastrin)、胆囊收缩素(CCK)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)等结构或功能相近的胃肠激素无明显交叉反应。
5. 灵活保存形式:提供冻干粉(便于长期运输与储存)或含保护剂的液体形式,用户可根据实验安排选择。
6. 详尽技术支持:每份产品配套完整的使用指南、推荐稀释比例及Troubleshooting建议,并可通过或邮件获取专业技术支持。
三、储存条件
为确保抗体活性与稳定性,请严格按照以下条件储存:
· 未开封产品:若为冻干粉形式,应于-20°C干燥避光保存,有效期通常为24个月;若为液体形式,可于-20°C长期保存(避免反复冻融),或于4°C短期保存(≤1个月)。
· 复溶后抗体:冻干粉需用无菌去离子水或推荐缓冲液按说明书指示体积复溶。复溶后建议分装为单次使用量,于-20°C或-80°C保存,避免反复冻融导致效价下降。4°C保存的复溶抗体应在1周内使用完毕。
· 工作液:稀释后的抗体工作液不建议长期保存,应现配现用。若必须保存,可于4°C避光存放不超过48小时。
注意事项:所有操作过程应避免强光直射、剧烈震荡及污染。解冻时建议置于冰上缓慢融化,切勿37°C快速解冻。
四、工作原理
抗MTLN抗体的工作原理基于抗原-抗体的高度特异性结合。MTLN作为一种分泌型小分子肽,在样本制备过程中可被释放并保持其抗原表位完整性。本抗体通过其可变区(VH/VL)精准识别MTLN蛋白上的特定线性或构象表位,形成稳定的抗原-抗体复合物。
在不同实验平台中,该结合事件被转化为可检测信号:
Western Blot:抗体与转印至膜上的MTLN结合后,通过酶标二抗催化底物显色,实现目标条带可视化。
免疫组织化学(IHC):抗体与组织切片中内源性MTLN结合,经显色系统产生棕褐色沉淀,定位MTLN在胃肠道特定细胞中的表达。
免疫荧光(IF):荧光标记二抗与一抗结合,在共聚焦显微镜下显示MTLN的亚细胞分布。
ELISA:包被板捕获样本中MTLN,加入本抗体后形成“夹心"复合物,通过酶促反应定量MTLN浓度。
该抗体的高亲和力确保了即使在低丰度表达条件下也能有效检测MTLN,为研究其在生理或病理状态下的动态变化提供可靠工具。
五、解决实验中的哪些问题
1. MTLN表达水平检测困难:由于MTLN为小分子肽且在组织中表达量较低,常规抗体易出现假阴性。本抗体经优化筛选,具备高灵敏度,可有效检测pg级MTLN。
2. 非特异性条带干扰:在Western Blot中,常因抗体交叉反应出现杂带。本产品经多轮吸附纯化,显著降低非特异结合,获得清晰单一目标条带。
3. 组织定位模糊:IHC实验中,MTLN阳性信号易被背景掩盖。本抗体配合优化的抗原修复方案,可清晰显示十二指肠隐窝底部Mo细胞的特异性染色。
4. 批次差异导致结果不可重复:St John's Laboratory的标准化生产流程确保每批次抗体性能稳定,减少因试剂变异导致的实验失败。
5. 低丰度样本检测限不足:在血清、肠腔灌洗液等体液样本中,MTLN浓度极低。本抗体适用于高灵敏ELISA平台,检测下限可达10 pg/mL。
六、使用方法
以下为通用操作指南,具体参数请根据实验类型及样本特性优化:
1. Western Blot
样本制备:取新鲜组织或细胞,加入RIPA裂解液,冰上裂解30分钟,12,000×g离心15分钟,取上清。
电泳:建议使用Tris-Tricine SDS-PAGE胶,上样量20–50 µg总蛋白。
转膜:0.22 µm PVDF膜,100 V恒压转膜60分钟(冰浴)。
封闭:5%脱脂奶粉/TBST,室温1小时。
一抗孵育:本抗体用TBST稀释,4°C孵育过夜。
二抗孵育:HRP标记抗兔/鼠IgG,室温1小时。
显色:ECL化学发光,X光片或成像系统曝光。
2. 免疫组织化学(IHC)
切片脱蜡水化:二甲苯→梯度乙醇→PBS。
抗原修复:柠檬酸钠缓冲液(pH6.0),高压锅加热2分钟,自然冷却。
阻断内源性过氧化物酶:3% H₂O₂,室温10分钟。
血清封闭:5%正常山羊血清,室温30分钟。
一抗孵育:抗体稀释液,4°C过夜。
二抗及显色:按试剂盒说明操作,DAB显色,苏木精复染。
3. ELISA
包被:MTLN标准品或样本加入预包被捕获抗体的96孔板。
检测抗体:本抗体作为检测抗体(1:1000稀释),37°C孵育1小时。
显色读数:按ELISA试剂盒流程操作。
七、常见问题与解决方案
Q1:Western Blot未见目标条带
A:可能原因包括抗体稀释度过高、样本中MTLN表达量过低、电泳条件不适合小分子蛋白或转膜效率差。建议:降低稀释比至1:200;确认样本来源;改用Tris-Tricine胶;延长转膜时间或增加电流;设置阳性对照。
Q2:IHC背景过高
A:可能因封闭不充分、一抗浓度过高或内源性生物素干扰。建议:延长封闭时间至1小时;梯度测试一抗稀释度;使用生物素阻断试剂;增加洗涤次数。
Q3:非特异性条带出现
A:可能源于抗体交叉反应或样本降解。建议:提高封闭液浓度;添加0.1% Tween-20至抗体稀释液;使用新鲜蛋白酶抑制剂;验证抗体特异性。
Q4:IF信号微弱
A:可能因透化不充分、抗体穿透性差或荧光淬灭。建议:优化透化剂浓度;延长一抗孵育时间(48小时);使用抗淬灭封片剂;检查荧光显微镜滤光片匹配性。
Q5:ELISA标准曲线不理想
A:可能因标准品溶解不当、抗体失活或孵育温度波动。建议:标准品用含0.1% BSA的PBS溶解;避免抗体反复冻融;确保孵育箱温度恒定(37±0.5°C);每板设复孔及空白对照。
Q6:抗体沉淀或浑浊
A:可能因保存不当导致蛋白聚集。建议:离心(12,000×g, 5分钟)取上清使用;避免4°C长期存放液体抗体;复溶时缓慢加入缓冲液并轻柔混匀。
八、免责声明
1. 本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理,仅个人观点,具体以品牌信息文档为准。
2. 本产品仅供科学研究使用,不得用于任何临床诊断、治疗、预防或人体/动物体内注射用途。
3. St John's Laboratory已尽努力确保产品信息准确,但不对因使用本产品导致的直接或间接损失承担责任。
4. 用户应自行验证抗体在特定实验体系中的适用性,包括样本类型、处理方法及检测平台。
5. 产品性能受储存、操作及环境因素影响,不当使用导致的失效不在保修范围内。
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